CY5.5-Streptavidin,CY5.5标记链霉亲和素的合成步骤
CY5.5-Streptavidin,CY5.5标出链霉亲和素的提炼工作步骤
CY5.5标记链霉亲和素是将近红外荧光染料CY5.5与链霉亲和素蛋白通过共价键连接形成的荧光标记物。链霉亲和素是一种四聚体蛋白,具有极强的生物素结合能力,常用作生物标记、分子捕获及信号放大系统的核心组成部分。通过CY5.5标记,可使链霉亲和素具备近红外成像功能,实现高灵敏度的生物检测与分子追踪。
合成图片工作步骤链霉亲和素的备制与缓存液更换链霉亲和素一般说来购自工商业纯品或采用整顿展示取得。为加强组织领导标示现象的能够性,蛋白酶需迁移至无氨基加载液(如PBS pH 7.4)或含弱偏碱的加载液中,尽量不要Tris等含有游走氨基的加载安全体系干扰信号偶联现象。CY5.5-NHS酯的做准备选择含生物NHS酯的CY5.5有机染料,易溶于无水DMSO或DMF,衡量高生物。该生物酯是可以与蛋白质表面上的赖氨酸氨基有效反馈。标上响应将链霉亲和素水溶液与一定量的CY5.5-NHS酯比调,想法气温一样把握在制冷,想法时长为1-2小的时候。此操作过程经过Cy5.5-NHS酯与核血清赖氨酸残基上的技师考试氨基再次发生酰胺化想法,保持共价联接。为了更好地绝对标上能力与核血清活性酶类,想法必要条件需透彻把握,防范过快标上诱发核血清构象优化。中断想法与加载液更换表现进行后,用假如有游走氨基的Tris减慢液解除表现。那么根据透析或氧分子式筛色谱(如Sephadex G-25)清除未表现的游走活性染料及小氧分子式不溶物,时更换到比较适合储藏和软件的减慢液中。纯化与果汁会根据须得,可所采用凝胶的作用进行过滤层析或亲和层析进步纯化标出血清,的还原不必要的染剂和响应副生成物。浓缩液操作步骤利用反渗透装置机械上下调整血清溶液浓度,要求后面测试要。研究方法依据太阳光的紫外线-看得出分光光度计旋光度的测定蛋白酶酶酶与颜料的消化吸收峰,折算标志度。荧光光谱图填写近红外火箭发射使用性能。SDS-PAGE电泳依照荧光显像可的检测蛋白酶酶酶的标志情形。怪物几丁质酶依据怪物素依照能力素质实验室(如ELISA或怪物层抵触的技术)印证,为了确保标志后蛋白酶酶酶节构与功能模块未受关系。产品名称:CY5.5-Streptavidin,CY5.5记号链霉亲和素
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